細菌鞭毛染色及其運動的觀察
2017-04-19 來自: 鶴壁市百惠生物科技有限公司 瀏覽次數(shù):1773
實驗材料和用具
普通變形菌(Proteus vulgaris)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面、鞭毛染色液、0.01%美藍水溶液、香柏油、二甲苯、無菌水、凡士林;顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、凹載玻片、蓋玻片、鑷子、細玻棒、吸水紙。
操作步驟
(一)細菌鞭毛染色
1.活化菌種 將保存的變形菌在新制備的普通牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上連續(xù)移種2~3次,每次于30℃培養(yǎng)10~15h?;罨缶N備用。
2.制片 在干凈載玻片的一端滴一滴蒸餾水,用無菌操作法,以接種環(huán)從活化菌種中取少許菌苔(注意不要帶培養(yǎng)基),在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜,使菌液隨水滴緩緩流到另一端,然后平放,于空氣中干燥。
3.染色
(1)滴加鞭毛染色液A液,染3~5min。
(2)用蒸餾水充分洗凈A液,使背景清潔。
(3)將殘水瀝干或用B液沖去殘水。
(4)滴加B液,在微火上加熱使微冒蒸汽,并隨時補充染料以免干涸,染30~60S。
(5)待冷卻后,用蒸餾水輕輕沖洗干凈,自然干燥或濾紙吸干。
4.鏡檢 先用低倍鏡和高倍鏡找到典型區(qū)域,然后用油鏡觀察。菌體為深褐色,鞭毛為褐色。注意觀察鞭毛著生位置(鏡檢時應多找?guī)讉€視野,有時只在部分涂片上染出鞭毛)。
(二)細菌運動的觀察
1.壓滴法
(1)制備菌液:從幼齡菌斜面上,挑數(shù)環(huán)菌放在裝有1~2mL無菌水的試管中,制成輕度混濁的菌懸液。
(2)取2~3環(huán)稀釋菌液于潔凈載玻片中央,再加入一環(huán)0.01%的美藍水溶液,混勻。
(3)用鑷子夾一潔凈的蓋玻片,先使其一邊接觸菌液,然后慢慢地放下蓋玻片,這樣可防止產(chǎn)生氣泡。
(4)鏡檢:將光線適當調(diào)暗,先用低倍鏡找到觀察部位,再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細菌鞭毛運動和布朗運動,后者只是在原處左右擺動,細菌細胞間有明顯位移者,才能判定為有運動性。
2.懸滴法
(1)取潔凈蓋玻片,在四周涂少許凡士林。
(2)在蓋玻片中央滴一小滴菌液。
(3)將凹玻片的凹窩向下,使凹窩中心對準蓋玻片中央的菌液,輕輕地蓋在蓋玻片上,便凹玻片與蓋玻片粘在一起(注意液滴不得與凹玻片接觸)。
(4)小心將玻片翻轉(zhuǎn)過來,使菌液正好懸在窩的中央。再用火柴棒輕壓蓋玻片四周使封閉,以防菌液干燥。
(5)鏡檢:將光線適當調(diào)暗,先用低倍鏡找到懸滴的邊緣后,再將菌液移至視野中央,換用高倍鏡觀察,注意細菌是如何運動的,它與分子布朗運動的不同。